超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測(cè)試盒的測(cè)定意義
更新時(shí)間：2023-12-08 點(diǎn)擊次數(shù)：230次超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測(cè)試盒的測(cè)定意義
(測(cè)紅細(xì)胞)
一、測(cè)定意義：
ATP 酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上，是生物膜
上的一種蛋白酶，它在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳
遞方面具有重要的作用，機(jī)體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下，
此酶活力發(fā)生一系列改變。
二、測(cè)定原理：
ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無(wú)機(jī)磷，測(cè)定無(wú)機(jī)磷的
量可判斷 ATP 酶活力的高低。
三、試劑組成與配制：（試劑盒有效期 6 個(gè)月）
四、紅細(xì)胞的前處理：
1、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（見(jiàn)附錄）或血紅蛋白測(cè)定（試劑本所有售）。
2、紅細(xì)胞溶血液的制備：
a、壓積紅細(xì)胞溶血液的制備：取肝素抗凝全血，1000
轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，棄上層血清，留下層壓積紅
細(xì)胞，取一定量的壓積紅細(xì)胞，加 49 倍的雙蒸水，
例如取 5μL 的壓積紅細(xì)胞加入 245μL 雙蒸水中，混
勻，使其充分溶血，對(duì)光觀察直至溶液透亮。如果
預(yù)試結(jié)果太高，再將溶血液稀釋成不同濃度再進(jìn)行
預(yù)試后，再?zèng)Q定取樣濃度。
b、全血紅細(xì)胞溶血液的制備：取小鼠全血，輕輕搖勻，
取一定量的全血按照 1：
24 的體積比加 24 倍雙蒸水，
制成 25 倍稀釋的溶血液，例如取 5μL 的全血加雙蒸
水 120μL 充分混勻，制成 25 倍稀釋的溶血液。對(duì)光
觀察直至溶液透亮。如果預(yù)試結(jié)果太高，再將溶血
液稀釋成不同濃度再進(jìn)行預(yù)試后，再?zèng)Q定取樣濃度。
[注 1]：制備好的溶血液盡快進(jìn)行檢測(cè)，否則易失活，
因而必須在所有的準(zhǔn)備工作做好以后再配制
溶血液。
[注 2]：用不完的抗凝全血 4℃可保存 2～3 天， -20℃
以下保存一周或者更長(zhǎng)時(shí)間。
[注 3]：不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑稀釋樣本。
[注 4]：預(yù)試結(jié)果將絕對(duì)吸光度值（測(cè)定管吸光度值—
對(duì)照管吸光度值）控制在 0.2 左右為宜。
附錄Ⅰ：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法
紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有以下三種方法，只需取其中一種即可以。
1、計(jì)數(shù)板直接紅細(xì)胞計(jì)數(shù)：
①、紅細(xì)胞稀釋液的配制：檸檬酸三鈉 3.8 克，甲醛
1mL，雙蒸水 100mL，混勻，4℃保存。
②、取 1 支試管，加入紅細(xì)胞稀釋液 2mL，取抗凝全
血 10µl 加入試管稀釋液中，反復(fù)吹吸數(shù)次，
再將試管顛倒數(shù)次混勻。
③、取一滴稀釋血液灌入計(jì)數(shù)板。（應(yīng)一次灌滿，而且
不要灌得太多。）
④、用高倍鏡計(jì)數(shù)左上、左下、右上、右下，中央 5
個(gè)中方格的紅細(xì)胞數(shù)，將數(shù)得的數(shù)字×10 10，
即為每升血中的紅細(xì)胞數(shù)。
2、光電比濁法計(jì)紅細(xì)胞數(shù)：
取試管 1 支，加入上述紅細(xì)胞稀釋液 4mL，再
取 20µl 抗凝全血，加入 4mL 稀釋液中，反復(fù)吹吸數(shù)
次，再將試管顛倒數(shù)次混勻，立即倒入比色杯中，
于 540nm，1cm 光徑，雙蒸水調(diào)零進(jìn)行比色，記下
吸光度值。以計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo)，
以相應(yīng)管的吸光度值為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可
以不做曲線，用附錄Ⅱ參考標(biāo)準(zhǔn)曲線圖二（鼠紅細(xì)
胞數(shù)與比濁法吸光度換算曲線）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出
紅細(xì)胞數(shù)。
3、用血紅蛋白（Hb）來(lái)?yè)Q算紅細(xì)胞數(shù)：
取 10µl 抗凝全血加入 2.5mL 血紅蛋白測(cè)試液
（本所有供應(yīng)）中，混勻，靜置 10 分鐘，于 540nm，
1cm 光徑，雙蒸水調(diào)零進(jìn)行比色。將測(cè)得的吸光度
乘以 367.7 即為血紅蛋白的值。以計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的紅細(xì)
胞的數(shù)值為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)管的血紅蛋白數(shù)為縱坐
標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可以不做曲線，用附錄Ⅱ的參
考標(biāo)準(zhǔn)曲線圖一（鼠紅細(xì)胞數(shù)與血紅蛋白數(shù)的換算
曲線）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出紅細(xì)胞數(shù)。
超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶測(cè)試盒的測(cè)定意義
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