大鼠環(huán)磷酸腺苷（cAMP） ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)總結(jié)和經(jīng)驗(yàn)
更新時(shí)間：2015-08-27 點(diǎn)擊次數(shù)：1269次 采用酵母致熱大鼠制作大鼠發(fā)熱動(dòng)物模型,以復(fù)方阿司匹林作為陽(yáng)性對(duì)照藥,通過(guò)觀察疏解退熱湯對(duì)大鼠模型的一般情況、用免疫生化法檢測(cè)大鼠下丘腦內(nèi)側(cè)視前區(qū)和正中視前區(qū)PGE2、cAMP的含量進(jìn)一步探討本方治療小兒外感發(fā)熱的退熱療效及其機(jī)理,來(lái)證明其組方的合理性,以進(jìn)一步指導(dǎo)應(yīng)用。
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方法:本實(shí)驗(yàn)分為兩大部分。均選取健康雄性Wistar大鼠,體重約180-200g。(1)對(duì)酵母所致發(fā)熱大鼠體溫的影響:先將大鼠實(shí)驗(yàn)室內(nèi)適應(yīng)3天,可自由進(jìn)食水,每天測(cè)體溫2次。實(shí)驗(yàn)時(shí)同法測(cè)體溫3次,每次間隔半小時(shí),剔除體溫波動(dòng)超過(guò)0.3℃的大鼠,取3次體溫的平均值作為基礎(chǔ)體溫。將大鼠隨機(jī)分成5組,除正常組外,其余4組均于大鼠背部皮下注射20%酵母混懸液10ml/kg。注射酵母8小時(shí)后選擇體溫上升0.8℃以上者,隨機(jī)分為模型組、疏解退熱湯高劑量組(簡(jiǎn)稱高劑量組)、疏解退熱湯低劑量組(簡(jiǎn)稱低劑量組)及復(fù)方阿司匹林組(簡(jiǎn)稱A.P.C組),每組10只。以上各組用灌胃法給藥1次,給藥容量為10ml/kg,正常組及模型組給予等量蒸餾水。從給藥后1h、2h、3h、4h分別測(cè)量體溫1次。(2)對(duì)酵母所致發(fā)熱大鼠下丘腦組織中前列腺素E2(PGE2)、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)含量的影響:制備發(fā)熱大鼠模型同前。每組20只大鼠。以上各組用灌胃法給藥1次,給藥容量為10ml/kg,正常組及模型組給予蒸餾水,高劑量組給予疏解退熱湯(2.1g/kg),低劑量組給予疏解退熱湯(1.1g/kg),A.P.C組給予復(fù)方阿司匹林(0.1g/kg)。分別于給藥后2h、4h測(cè)量體溫,然后快速斷頭取腦(1分鐘內(nèi)取出),取出下丘腦,測(cè)定前列腺素E2(PGE2)、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)含量,用ELISA試劑盒嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明書進(jìn)行,并將各組的體溫值分別與含量進(jìn)行相關(guān)分析。
結(jié)果:⑴對(duì)酵母致熱大鼠體溫的影響:在注射酵母8h后,與正常組相比,模型組、高劑量組、低劑量組及A.P.C大鼠的體溫均明顯升高(P0.05),而與低劑量、A.P.C組相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P$lt;$0.05)。將給藥后2h、4h正常組、模型組、高劑量組的體溫值分別與相應(yīng)PGE2、cAMP含量進(jìn)行相關(guān)分析,結(jié)果表明二者之間均存在明顯正相關(guān)(P$lt;$0.01)。結(jié)論:疏解退熱湯能顯著抑制酵母混懸液誘導(dǎo)的大鼠發(fā)熱,說(shuō)明本方有解熱作用,其機(jī)理可能是通過(guò)某種途徑減少中樞發(fā)熱介質(zhì)的含量來(lái)發(fā)揮解熱作用的。
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