過(guò)氧化物酶POD試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)啦!
更新時(shí)間:2017-12-15 點(diǎn)擊次數(shù):1046次過(guò)氧化物酶POD試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)啦!
測(cè)定意義:
POD(EC 1.11.1.7)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可催化過(guò)氧化氫氧化酚
類和胺類化合物,具有消除過(guò)氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。
測(cè)定原理:
POD 催化 H2O2氧化特定底物,在 470nm 有特征光吸收。
試劑的組成:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體×1 瓶,4℃保存;用時(shí)加入 3mL 試劑一充分溶解待用;用不完的試劑 4℃保存;
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提
取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,
加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)
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注意:
1、若一次性測(cè)定樣本較多,可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液,在 37℃(哺
乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)放置 10min 以上,測(cè)定時(shí)加入 10µL 樣本和 240µL 混合液測(cè)
定。
2、如果 ΔA 小于 0.005,可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到 5min。如果 ΔA 大于 0.5,可將樣本用提取液
稀釋后測(cè)定,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)
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