電誘導(dǎo)細(xì)胞融合試劑盒的操作步驟
更新時(shí)間：2018-07-18 點(diǎn)擊次數(shù)：1819次電誘導(dǎo)細(xì)胞融合試劑盒的操作步驟
信帆生物供應(yīng)電誘導(dǎo)細(xì)胞融合試劑盒，產(chǎn)品現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量穩(wěn)定，庫(kù)存充足！
細(xì)胞融合(cell fusion)是兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞融合并形成一個(gè)細(xì)胞過(guò)程。在自然情況下，
體內(nèi)、體外發(fā)生的細(xì)胞融合的現(xiàn)象稱(chēng)為自然融合；體外培養(yǎng)的細(xì)胞可用人工方法誘導(dǎo)相同或
者不同細(xì)胞間發(fā)生融合，稱(chēng)為人工誘導(dǎo)融合。體外培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞均可以做
融合，但成功概率的是單層貼壁細(xì)胞。
電誘導(dǎo)細(xì)胞融合試劑盒(Electrofusionof cell)是 20 世紀(jì) 80 年代發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)生物工程技術(shù)，其作用原理是先使細(xì)胞在在電場(chǎng)
中極化成偶極子，并延電力線成串排列，用高強(qiáng)度、短時(shí)程的電脈沖擊穿細(xì)胞膜，促使細(xì)胞
發(fā)生融合。該細(xì)胞融合方法具有無(wú)毒、融合頻率高、易控制等優(yōu)點(diǎn)。該試劑盒有效成分經(jīng)嚴(yán)
格無(wú)菌處理，僅用于科研領(lǐng)域，不用于診斷或治療。
電誘導(dǎo)細(xì)胞融合試劑盒的操作步驟
操作步驟(僅供參考)：
1、 準(zhǔn)備細(xì)胞：
⑴SP2/0 骨髓瘤細(xì)胞：融合前，提前 1 天將 SP2/0 骨髓瘤細(xì)胞傳代，培養(yǎng)至其處于對(duì)數(shù)生
。將該細(xì)胞收集于無(wú)菌離心管中，1000g 離心 8~10min，棄上清液。加入 10ml 無(wú)血
清 RPMI 1640 培養(yǎng)基，將細(xì)胞沉淀懸浮起來(lái)備用。
⑵淋巴細(xì)胞：融合前，取經(jīng) 3 次用目的抗原免疫的 BALB/C 小鼠脾臟，每次免疫間隔 2~3
周，后一次免疫后 3~4 天處死小鼠，取出脾臟，加入 10ml 無(wú)血清 RPMI 1640 培養(yǎng)基，
將細(xì)胞沉淀懸浮起來(lái)備用。
⑶飼養(yǎng)細(xì)胞：融合前，收集健康的 BALB/C 小鼠腹腔中的腹水，將腹水（巨噬細(xì)胞懸液）
1000g 離 心 8~10min ， 棄 上 清 液 。 加 入 25ml HAT 選 擇 培 養(yǎng) 液 （ 按 HAT Media
Supplement：含胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)液=1：49 配制），混勻，接種到 96 孔或
24 孔培養(yǎng)板。經(jīng)培養(yǎng)形成的飼養(yǎng)層細(xì)胞，可以輔助新的融合細(xì)胞的生長(zhǎng)。
2、 細(xì)胞融合：
⑴將骨髓瘤細(xì)胞和淋巴細(xì)胞按 5：1 比例混合，細(xì)胞密度為 1.5×107 個(gè)/ml，細(xì)胞懸液以 1000g
離心 8~10min，棄上清液。
⑵將細(xì)胞沉淀加入 5ml PM 脈沖緩沖液，1000g 離心 8~10min，棄上清液。重復(fù) 1 次該
步驟。
⑶用少量 PM 脈沖緩沖液重懸細(xì)胞沉淀，一般細(xì)胞濃度應(yīng)達(dá)到 2×106 個(gè)/ml，注入細(xì)胞電融
合儀的電極小池或融合槽。注意：應(yīng)根據(jù)不同體積的電極小池或融合槽加入細(xì)胞懸液，大多
數(shù)細(xì)胞電融合儀的融合容積在 20~4000μl 之間。按如下條件電泳：交流電場(chǎng)頻率 1MHz，
振幅 250V/cm，時(shí)間 30s。在顯微鏡下觀察，看到 80%的細(xì)胞已經(jīng)形成珠串時(shí)，立即加穿
孔電脈沖，其條件為：脈沖幅度 5kV/cm，時(shí)間常數(shù) 20ms，脈沖個(gè)數(shù) 5，間隔 1s。
⑷1000g 離心 8~10min，棄上清液。向細(xì)胞沉淀加入 25ml HAT 選擇培養(yǎng)液，混勻，接種
到 96 孔或 24 孔培養(yǎng)板，37℃ 5%CO 培養(yǎng) 12~24h。
3、 篩選：細(xì)胞融合后 12~24h，將細(xì)胞接種到 HAT 選擇培養(yǎng)液中，細(xì)胞密度達(dá)到 60~80%
匯合率之間，容許細(xì)胞進(jìn)一步生長(zhǎng)，進(jìn)行異核體篩選，4~14 天后可觀察到大集落的雜
交瘤細(xì)胞克隆。
結(jié)果：一般培養(yǎng) 3~5 天后即可見(jiàn)小克隆出現(xiàn)，雜交細(xì)胞，呈圓形且透明，其他細(xì)胞透
光性差并逐漸死亡。當(dāng)培養(yǎng) 8~12 天后，克隆可長(zhǎng)至孔底面積的 30~50%，此時(shí)可取培養(yǎng)
上清液進(jìn)行抗體檢測(cè)。一旦檢測(cè)到分泌預(yù)定抗體的克隆，應(yīng)及時(shí)將陽(yáng)性克隆轉(zhuǎn)種 24 孔培養(yǎng)
板進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)：
1、應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免被微生物污染。
2、 如需 HAT 選擇系列產(chǎn)品，可選擇 Leagene A Media Supplement(50×)、HT Media
Supplement(50×)、HAT Media Supplement(50×)。
電誘導(dǎo)細(xì)胞融合試劑盒的操作步驟
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