Triton-NH4OH細胞裂解液配制方法配制方法詳細介紹
更新時間：2019-04-29 點擊次數(shù)：3092次Triton-NH4OH細胞裂解液(Triton-NH4OH Lysis Buffer)經(jīng)過優(yōu)化配方，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(Lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。本裂解液經(jīng)過濾除菌，經(jīng)過Triton-NH4OH Lysis Buffer處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續(xù)的細胞培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。
Triton-NH4OH細胞裂解液配制方法配制方法詳細介紹：
中文名：Triton-NH4OH細胞裂解液
供應(yīng)商：信帆生物
規(guī)格：100ml
分類：細胞組分分離
保存：4℃,6個月
用途： 裂解細胞獲得細胞外基質(zhì)
說明：主要由0.5%TritonX-100、20mMNH4OH、PBS組成
適用范圍：限于科研，實驗，不作
Triton-NH4OH細胞裂解液操作步驟：
1.制備細胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法制備成細胞懸液，離心棄上清。
2.裂解: 加入3～5倍細胞沉淀體積的Triton-NH4OH Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3.離心: 4℃，離心5min，棄紅色上清。如無低溫離心機，本步驟亦可在室溫下操作。
4.如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。
5.洗滌：根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，離心2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細胞沉淀體積的5倍以上。
6.如有必要，重復(fù)上述步驟5一次，共洗滌1～2次。
7.根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
配制方法：
1.收集胰蛋白酶消化的細胞并離心，用PBS清洗。
2.用100μl RIPA緩沖液冰浴溶解沉淀10min（每500000個細胞20μl RIPA緩沖液）。
3.10000rpm，4℃離心10min，取上清轉(zhuǎn)移至新管。
4.用考馬斯亮藍法檢測蛋白質(zhì)濃度。
5.用裂解緩沖液將溶液濃度調(diào)到5mg/ml,每小瓶中放100μl，-80℃儲存。
6.按照1:1體積比混合2×樣品緩沖液，煮沸5min后，室溫放置5min.
7.短時離心后點樣電泳檢測。
配制方法注意事項：
1.制備細胞懸液時應(yīng)根據(jù)實驗需要，不一定要制備成單細胞懸液。
2.后續(xù)試驗如果是用于細胞培養(yǎng)，操作過程中應(yīng)注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內(nèi)操作。
3.離心步驟盡量在4℃離心機上操作。
4.常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。
5.離心洗滌后，通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的檢測。
6.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
