丙二醛(MDA)測試盒說明書 本試劑盒是在國內(nèi)外眾多測試方法的基礎上改進的一種微量、快速、簡便、準確、對操作 人員健康無損害的測試方法。通過測試可反映出血清(漿)、乳汁等細胞外液、紅細胞、白細 胞、培養(yǎng)細胞以及各種動植物的細胞水平及亞細胞水平的脂質(zhì)過氧化物的量。 一、測定意義: 機體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基,后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸 (polyunsaturated fatty acid,PUFA),引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用,并因此形成脂質(zhì)過氧化物。 如:醛基(丙二醛 MDA)、酮基、羥基、羰基、氫過氧基或內(nèi)過氧基,以及新的氧自由基等。脂 質(zhì)過氧化作用不僅把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學劑,即非自由基性的脂類分解產(chǎn)物,而且通過鏈式 或鏈式支鏈反應,放大活性氧的作用。因此,初始的一個活性氧能導致很多脂類分解產(chǎn)物的形 成,這些分解產(chǎn)物中,一些是無害的,另一些則能引起細胞代謝及功能障礙,甚至死亡。氧自 由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸(PUFA)的過氧化引起細胞損傷,而且還能通過脂氫過 氧化物的分解產(chǎn)物引起細胞損傷。因而測試 MDA 的量常??煞从硻C體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度,間 接地反映出細胞損傷的程度。 MDA 的測定常常與 SOD 的測定相互配合,SOD 活力的高低間接反應了機體清除氧自由基的 能力,而 MDA 的高低又間接反應了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度,通過 SOD 與 MDA 的結果 分析有助于醫(yī)學、生物學、藥理及工農(nóng)業(yè)生物試劑的發(fā)展。 二、測試原理: 過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛 (MDA)可與硫代酸 縮合,形成紅色產(chǎn)物, 在 532nm 處有大吸收峰。因底物為硫代酸(Thibabituric Acid TBA)所以此法稱 TBA 法。 ∗ ) (TBA 三、 測試所需儀器設備: 可見光分光光度計,可調(diào)到 95℃左右的恒溫水浴箱或沸水鍋,離心機。 四、試劑盒組成與配制(100T/96 樣): 試劑一:液體 20ml×1 瓶,室溫保存。(天冷時會凝固,每次測試前適當水浴加溫以加速溶解, 直至透明方可應用)。 試劑二:液體 12ml×1 瓶,用時每瓶加 340ml 雙蒸水混勻,4℃冷藏(注意不要碰到皮膚上)。 試劑三:粉劑×1 支,用時將粉劑加入到 90℃~100℃的熱雙蒸水 60ml 中,(在溶解過程中可 適當加熱),充分溶解后用雙蒸水補足至 60ml 再加冰醋酸 60ml,混勻,配好的試劑 避光冷藏。(冰醋酸自備) 標準品:10nmol/ml 四乙氧基丙烷 5ml×1 瓶,4℃冷藏。 [注]:冰醋酸(分析純,乙酸濃度≥99.5%);測試盒冷藏至少可保存一年。 五、試劑盒組成與配制(50T/48 樣): 試劑一:液體 10ml×1 瓶,室溫保存。(天冷時會凝固,每次測試前適當水浴加溫以加速溶解, 直至透明方可應用)。 試劑二:液體 6ml×1 瓶,用時加 170ml 雙蒸水混勻,4℃冷藏。(注意不要碰到皮膚上)。 試劑三:粉劑×1 支,用時將粉劑加入到 90℃~100℃的熱雙蒸水 30ml 中,(在溶解過程中可 適當加熱),充分溶解后用雙蒸水補足至 30ml 再加冰醋酸 30ml,混勻,配好的 試劑避光冷藏。(冰醋酸自備) 標準品:10nmol/ml 四乙氧基丙烷 5ml×1 瓶,4℃冷藏。 |