信帆生物提供甲基化分析服務(wù)
更新時間：2017-12-15 點擊次數(shù)：1133次信帆生物提供甲基化分析服務(wù)
DNA甲基化研究是表觀遺傳學(xué)的重要內(nèi)容，真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá)，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。這種DNA修飾的方式在脊椎動物的胚胎發(fā)育過程中起著重要的調(diào)控作用，參與多種疾病包括各種腫瘤的發(fā)病機理，是目前表觀遺傳學(xué)研究的熱點。
主要技術(shù)原理
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而發(fā)生甲基化的胞嘧啶不變。根據(jù)某一待測位點或者調(diào)查的某一區(qū)域序列設(shè)計引物進行PCR擴增，通過PCR電泳、測序、熒光定量及質(zhì)譜等方法對擴增產(chǎn)物進行檢測，根據(jù)檢測結(jié)果分析哪些位點發(fā)生了甲基化及其甲基化的頻率。
主要服務(wù)方案
1、甲基化特異性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP）
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。設(shè)計針對某一待測位點的甲基化和非甲基化引物進行PCR擴增，通過電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物判定待測樣本是否存在甲基化位點。
2、亞硫酸氫鹽測序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。針對要調(diào)查的區(qū)域設(shè)計BSP引物進行PCR擴增，對擴增產(chǎn)物進行測序就可以判斷哪些CpG位點發(fā)生了甲基化；一般將PCR產(chǎn)物克隆后進行測序成功率會比較高。
信帆生物提供甲基化分析服務(wù)
實驗流程：
（1）BSP引物設(shè)計：針對感興趣的基因區(qū)域進行BSP引物的設(shè)計（擴增產(chǎn)物不超過400bp）
（2）亞硫酸氫鹽處理基因組DNA：提取基因組DNA并進行亞硫酸氫鹽的轉(zhuǎn)化
（3）PCR擴增目的片段：BSP引物擴增感興趣的區(qū)域
（4）克隆到載體：將PCR產(chǎn)物純化后連接到載體上
（5）克隆測序：挑取陽性菌斑，提取質(zhì)粒并測序（通常測序5個或10個克隆）
（6）序列分析：對測序的結(jié)果進行比對和甲基化分析
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