信帆生物為您總結(jié)：ELISA試劑盒選購指南
更新時間：2019-01-07 點擊次數(shù)：813次信帆生物為您總結(jié)：ELISA試劑盒選購指南
①靈敏度：反映的是試劑盒檢出被檢物質(zhì)的低量的能力，用戶可根據(jù)自己樣本中待檢指標的量選擇合適的試劑盒，如果待檢指標量很低，一般的試劑盒不能滿足要求，可選擇高敏的試劑盒。
②重復性：科學實驗講求重復性，一般試劑盒，其板內(nèi)和板間變異系數(shù)應該控制在15%以內(nèi)。
③特異性：試劑盒的特異性與試劑盒的關(guān)鍵組分，赭曲霉試劑盒，抗體對有關(guān)，若抗體對中之一為多抗，另一個必須為單抗，建議使用雙單抗。
④簡便性：在保證高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下，實驗時間越短，操作越便利，越容易受到用戶歡迎，這也不妨作為選擇試劑盒的一個指標。
a． 陽性判定值
陽性判定值（cut-off value）一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù)，以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標準。
用此法判斷結(jié)果要求實驗條件十分恒定，試劑的制備必須標準化，陽性和陰性的對照品應符合一定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴格按規(guī)定操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標本的實驗檢測而得到的?，F(xiàn)舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復鈣人血漿，陽性對照品HBsAg的含量標明為P=9±2ng/ml.每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后，先計算陰性對照A值的平均數(shù)（NCX）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），黃曲霉試劑盒，兩個平均數(shù)的差（P-N）必須大于一個特定的數(shù)值（例0.400），試驗才有效。3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX，試劑盒，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個陰性對照重新計算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上范圍，則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算： 陽性判定值=NCX+0.05 標本A值＞陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。應注意的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。
根據(jù)以上敘述可以看出，在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質(zhì)控作用，試劑變質(zhì)和操作不當均會產(chǎn)生'試驗無效'的后果。
b.標本/陰性對照比值
在實驗條件（包括試劑）較難保證恒定的情況下，這種判斷法較為合適。在得出標本（S）和陰性對照（N）的A值后，計算S/N值。也有寫作P/N的，這里的P不代表陽性(positive)，嘔吐毒素試劑盒，而是病人（patient）的縮寫，不應誤解。為避免混淆，更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中，有些作者定出S/N為陽性標準，現(xiàn)多為各種測定所沿用。實際上每一測定系統(tǒng)應該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，以致反應后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此，這類試劑盒規(guī)，如N<0.05（或其他數(shù)值），則按0.05計算，否則將出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
實際上每一測定系統(tǒng)應該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，以致反應后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。陽性判定值（cut-off value）一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù)，以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標準。ELISA試劑盒用此法判斷結(jié)果要求實驗條件十分恒定，陽性和陰性的對照品應符合一定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴格按規(guī)定操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標本的實驗檢測而得到的。
現(xiàn)舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復鈣人血漿，陽性對照品HBsAg的含量標明為P=9±2ng/ml。每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后，先計算陰性對照A值的平均數(shù)（NCX）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個平均數(shù)的差（P-N）必須大于一個特定的數(shù)值（例0.400），試驗才有效。3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個陰性對照重新計算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上范圍，則該次實驗無效。
陽性判定值按下式計算：
陽性判定值=NCX+0.05 標本A值＞陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。應注意的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，ELISA試劑盒而不是對各種試劑均可通用。
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