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丙酮酸激酶（PK）實(shí)驗(yàn)代測(cè)

丙酮酸激酶（pyruvate kinase,PK），別名丙酮酸磷轉(zhuǎn)稱(chēng)酶、磷酸丙酮酸激酶，其分子式wieC9H9N，縮寫(xiě)式為ATP：丙酮酸-2-O-磷酸轉(zhuǎn)移酶。在糖酵解系統(tǒng)里，它是催化形成第二個(gè)ATP反應(yīng)的酶。EC2．7．1．40。能以磷酸烯醇（phosphoenolpyruv- ate）丙酮酸和ADP生成丙酮酸和ATP·ΔGo1=-7．5kcal。除需要二價(jià)金屬離子外（Mg2+和Mn2+）外，還需要一價(jià)金屬離子（K+．Rb+，Cs+），在生理上起作用的大概是K+。分子量約25萬(wàn)。是催化ADP為ATP的形成，結(jié)果是形成丙酮酸的終產(chǎn)物。
測(cè)定原理：丙酮酸激酶（Pyruvate kinase.PK）在ADP存在下可催化PEP產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸再由LDH將其轉(zhuǎn)變?yōu)槿樗?，同時(shí)將NADH變?yōu)镹AD.　　
丙酮酸激酶,是紅細(xì)胞葡萄糖無(wú)氧酵解途經(jīng)中三個(gè)限速酶之一,直接關(guān)系著紅細(xì)胞能量代謝,此酶缺乏屬常染色體隱性遺傳,可能導(dǎo)致非球形紅細(xì)胞溶血性貧血.丙酮酸激酶的功能是在糖直接酵解過(guò)程中起催化作用,將磷酸烯醇丙酮酸的磷酸遞給二磷酸腺苷,使之磷酸化為高能量的三磷酸腺苷.丙酮酸激酶缺乏能使ATP的生成減少,因而影響紅細(xì)胞膜得到功能,如果約定縮短紅細(xì)胞的生存時(shí)間,造成溶血性貧血.同時(shí)血清丙酮酸激酶對(duì)判斷心肌損傷也有很高的科研意義.

產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下：
1、快速簡(jiǎn)便：速率法，30分鐘可完成20-40例樣本的測(cè)定。
2、取樣量微：取樣量?jī)H為20l左右
3、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放3個(gè)月有效。
4、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。
5、回收試驗(yàn)： X =101%。
6、受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復(fù)性強(qiáng)。
7、測(cè)試面廣：可測(cè)各種動(dòng)物血清（漿）、組織等
所需儀器及自備試劑：
1、紫外分光光度計(jì)（比色測(cè)定波長(zhǎng)為340nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）
3、漩渦混勻器
4、微量移液器

樣本收集與前處理：
血清（漿）可直接測(cè)定。
動(dòng)物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測(cè)定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說(shuō)明書(shū)。

操作流程：
1、取已預(yù)溫10分鐘的混合試劑加20l樣本
2、340nm波長(zhǎng)，0.5cm光徑測(cè)OD值為A1
3、37℃水浴15分鐘后,340nm波長(zhǎng)，0.5cm光徑測(cè)OD值為A2

丙酮酸激酶（PK）實(shí)驗(yàn)代測(cè)