羧酸酯酶活性測(cè)定試劑盒

（ Carboxylesterase，分光光度法 50T/48樣）

一、測(cè)定意義

哺乳動(dòng)物羧酸酯酶（CarE）廣泛分布于組織和器官中，

大部分的羧酸酯酶屬于絲-氨酸水解酶家族。CarE催化含酯

鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性和外源性物質(zhì)的水解，但不

能催化水解乙酰膽-堿及其類似物。CarE參與脂質(zhì)運(yùn)輸和代

謝，并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝

有關(guān)，有機(jī)磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE活性。

二、測(cè)定原理

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固藍(lán)顯色,在450nm檢

測(cè)光吸收速率來(lái)監(jiān)測(cè)萘酯生成速率，從而計(jì)算CarE活性。

三、自備儀器用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液

器槍、1mL玻璃比色皿、無(wú)水乙醇和蒸餾水。

四、試劑組成和配制 （未開封產(chǎn)品3個(gè)月內(nèi)有效）

試劑一：液體50mL×1 瓶，4℃保存

試劑二：液體30mL×2 瓶，4℃保存

試劑三：粉劑×2支，4℃保存，臨用前取1支試劑三加1.2mL

無(wú)水乙醇充分溶解

試劑四：粉劑×2支，-20℃保存

工作液配制：臨用前取試劑二1瓶，取少量試劑二加入到1

支試劑四中溶解，然后把溶解的1支試劑四和1支試

劑三加入到該瓶試劑二中，混勻充分，過(guò)濾，4℃避

光保存，可用1周。

五、樣本前處理

1、細(xì)菌、細(xì)胞樣品制備：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離

心后棄上清；按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL試劑

一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20%，超聲3s，間隔

10s，重復(fù)30次）；12000g在4℃離心30分鐘，取上清液

待測(cè)。

2、按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)1：5~10 的比例

（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿。

12000g，4℃離心30分鐘，取上清液待測(cè)。

3、液體樣本：直接取樣。

六、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到450nm，用蒸餾

水調(diào)零。

2. 工作液在37℃中預(yù)熱30min 以上。

3. 空白管：依次在1mL 玻璃比色皿中依次加入5μL蒸餾水，

1000μL預(yù)熱的工作液，迅速混勻后在450nm測(cè)定10s和

190s光吸收A1 和A2，△A空白管=A2-A1。注意：空白管只需

做1-2次。

4. 測(cè)定管：：依次在1mL 玻璃比色皿中依次加入5μL上清

液，1000μL預(yù)熱的工作液，迅速混勻后在450nm測(cè)定10s

和190s光吸收A3 和A4，△A測(cè)定管=A4-A3。

 羧酸酯酶活性測(cè)定試劑盒