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ATP 酶測定試劑盒 生化試劑

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ATP 酶測定試劑盒,此試劑盒可測試高速冷凍離心后的紅細胞膜、組織細胞膜、線粒體、微粒體的 ATP 酶。

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ATP 酶測定試劑盒

(貨號:A016-1比色法)

可測 Na +k +、Ca 2+Mg 2+、Ca 2+、Mg 2+-ATPase 樣本需高速離心

此試劑盒可測試高速冷凍離心后的紅細胞膜、組織細胞膜、線粒體、微粒體的 ATP 酶。

一、試劑組成與配制(50 /48 A016-1-1

試劑一:液體 10mL×2 瓶,4℃保存。

試劑二:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:粉劑×3 支,-20℃以下保存。用時每支加雙蒸水

5mL,現(xiàn)用現(xiàn)配。余下的-20℃以下可保存一周。

試劑五:粉劑×1 支。用時加雙蒸水 5mL,適當加熱溶解,

4℃保存。

試劑六:粉劑×1 支。用時加雙蒸水 10mL,室溫保存。

[ 1]

試劑七:液體 10mL×1 瓶。用時加雙蒸水至 25mL,4℃

存。

試劑八:粉劑×3 瓶。用時一支加雙蒸水 40mL 溶解(溶解

4℃可避光保存一周)。

試劑九:粉劑×1 瓶。用時每瓶加雙蒸水 100mL 溶解。室

溫保存。

試劑十:2.5mol/L 硫酸 100mL×1 瓶,4℃保存。

試劑十一:10mmol/L 標準磷貯備液 10mL×1 瓶,4℃保存。

雙蒸水: 1 瓶。

1μmol/mL 標準磷應用液配制:用時將貯備液 10 倍稀釋,

即取 1mL 加雙蒸水至 10mL。

定磷劑的配制:按雙蒸水∶試劑十∶試劑八∶試劑九

=2111 的比例配制,配好的定磷劑應

為淺黃色,若無色則試劑失效,若是藍色

則為磷污染,定磷劑需現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、試劑組成與配制(100 /96 A016-1-2):

試劑一: 液體 10mL×3 瓶,4℃保存。

試劑二: 液體 10mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三: 液體 10mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四: 粉劑×5 支,

-20℃以下保存。用時每支加水 5mL,

現(xiàn)用現(xiàn)配。余下的-20℃以下可保存一周。

試劑五: 粉劑×2 支。用時每支加雙蒸水 5mL,適當加熱

溶解,4℃保存。

試劑六: 粉劑×1 支。用時加雙蒸水 10mL,室溫保存。

[ 1]

試劑七: 液體 10mL×1 瓶。用時加雙蒸水至 25mL,4℃

保存。

試劑八: 粉劑×5 瓶。用時一支加雙蒸水 40mL 溶解(溶

解后 4℃可避光保存一周)。

試劑九: 粉劑×2 瓶。用時每瓶加雙蒸水 100mL 溶解。室

溫保存。

試劑十:2.5mol/L 硫酸 100mL×2 瓶,4℃保存。

試劑十一:10mmol/L 標準磷貯備液 10mL×1 瓶,4℃保存。

雙蒸水: 2 瓶。

1μmol/mL 標準磷應用液配制:用時將貯備液 10 倍稀釋,

即取 1mL 加雙蒸水至 10mL

定磷劑的配制:按雙蒸水∶試劑十∶試劑八∶試劑九

=2111 的比例配制,配好的定磷劑

應為淺黃色,若無色則試劑失效,若是藍

色則為磷污染,定磷劑需現(xiàn)用現(xiàn)配。

[ 1]:試劑六為過飽和溶液,所以在配制時用 90℃

100℃的熱雙蒸水 10.3mL(熱脹冷縮)邊隔水加熱

邊用玻璃棒攪拌,以使其充分溶解。一次實驗用不

完再用時可能有結晶,用之前可以再次邊隔水加熱

邊玻璃棒攪拌使其溶解。

[ 2]:配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可

以用一次性塑料器皿,避免磷污染。

四、參考取樣量:

紅細胞膜取 100μL,2%組織細胞膜取 100μL2%線粒

體取 100μL,2%微線粒體取 100-200μL

五、如果您的樣本很多可以采用簡便操作法:

測試前將 A、BC、DE 五種混合試劑配制好:

根據規(guī)范操作表中各管的試劑量乘以您所需要測試的

樣本數(n)再放 12 只管的量(避免吸到最后試劑量不

夠),然后縱向混合。

七、測定意義:

ATP 酶存在于組織細胞膜及細胞器膜上,是生物膜上的一

種蛋白酶,它在物質運送、能量轉換以及信息傳遞方面具有重要

的作用。

八、測定原理:

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機磷,測定無機磷的

量可判斷 ATP 酶活力的高低。

九、注意點:

1 此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用

試管要求嚴格,要沒有一點磷,若試管放過磷酸或磷

酸鹽緩沖液,一定要洗得非常干凈,要先用洗潔精加

水煮,再用自來水沖,最后用雙蒸水沖干凈。

一次性塑料管或新玻璃管,避免磷污染是檢測成敗的

關鍵。

2、 定磷劑配好后,不可放置太久,一般保存一天,

現(xiàn)用現(xiàn)配。隨時放冰箱。

3、 采用先配 A、B、C、D、E 五種混合液中的幾種,

然后按簡化操作步驟進行檢測。這樣快捷、準確。

4、 所有配試劑的器皿均要專用,包括吸硫酸的吸管及盛

水的器皿,用新的。

5、本研究所有加厚的一次性塑料試管供應,請在訂購試劑

的同時訂購一次性塑料試管。

ATP 酶測定試劑盒

 

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