超微量 Na +K + Ca 2+Mg 2+總 ATP 酶測試盒 生化試劑
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超微量 Na +K + Ca 2+Mg 2+總 ATP 酶測試盒,ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機磷,測定無機磷的量可計算 ATP 酶活力的高低。
超微量 Na +K + Ca 2+Mg 2+總 ATP 酶測試盒
(測組織、培養(yǎng)細胞)
一、測定原理:
ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機磷,測定無機磷的量可
計算 ATP 酶活力的高低。
二、測定意義:
ATP 酶存在于組織細胞及細胞器的膜上,是生物膜上的一種
蛋白酶,它在物質(zhì)運送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳遞方面具有重要的
作用,機體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下,此酶活力發(fā)生一系列改變,
另外有些遺傳疾病也與此酶活力有關。
三、試劑組成與配制:
四、樣本的前處理:
1、組織的前處理:(組織勻漿上清液的制備參考實驗方法學)
準確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1:9 的比
例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機械勻漿,
2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清液(即 10%的勻漿上清
液),再用生理鹽水 10 倍稀釋成 1%,同時用考馬斯亮藍
試劑測定組織蛋白(試劑本所有售)。如果預試結(jié)果太高,
再將 1%的組織勻漿稀釋成不同濃度再進行預試后再決定
取樣濃度。
2、培養(yǎng)細胞的前處理:將培養(yǎng)細胞消化,離心,棄上清,留
下層細胞,每管加 0.2~0.3mL 生理鹽水或勻漿介質(zhì)制備成
10 7 /cm3細胞懸液,即 10 7 /mL,再進行破碎。破碎細胞的方
法有三種:①、用勻漿器勻漿。②、用超聲粉碎器粉碎。
③、反復凍溶 3 次(第③種方法有時會影響酶活力)。制備
好的細胞懸液不需要離心,同時用考馬斯亮蘭試劑測定組
織蛋白(試劑本所有售)。再將細胞勻漿液稀釋成不同濃度
進行預試,根據(jù)預試結(jié)果決定取樣濃度。
[注 1]:在測試加樣前要搖勻后取樣。
[注 2]:不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑作為樣本勻漿或
稀釋樣本。
[注 3]:預試結(jié)果將吸光度值(測定管吸光度值—對照
管吸光度值)控制在 0.2 左右為宜。
超微量 Na +K + Ca 2+Mg 2+總 ATP 酶測試盒