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精子快速染色液 生化試劑

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精子快速染色液,為達(dá)到良好染色效果,不同性狀精液標(biāo)本的涂片方式有所區(qū)別,可根據(jù)具體情況選擇下列涂片方法。

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精子快速染色液

(Quick Sperm Stain)

[儲(chǔ)存條件及有]

本試劑盒應(yīng)置室溫密封保存,有效期一年。

[樣本制片前處理]

涂片的制備:為達(dá)到良好染色效果,不同性狀精液標(biāo)本的涂片方式有所區(qū)別,可根據(jù)具體情況選擇下列涂片方法。

1、低粘度精液(“拉薄"技術(shù): 滴一小滴(5-10ul) 新鮮液化精液于清潔載玻片上,將推玻片保持與載玻片 30 度角,置于精液正前方,稍往后移與精液液滴接觸,即可見(jiàn)精液液滴沿推片下緣散開(kāi),再勻速沿載玻片平面平穩(wěn)向前滑動(dòng),制成適當(dāng)厚度涂片。若精子密度>20X10°/ml,取 5ul 量精液涂片: 若精子密度<20X10°ml,取 10-20ul 量精液涂片。

2、高粘稠度精液或低精子密度或充滿(mǎn)碎屑精液: 稀釋精漿或離心去精漿。取 0.2-0.5ml 精液加 10ml 生理鹽水,800g 離心 10 分鐘,去掉上清液,用生理鹽水調(diào)節(jié)精子密度至(40-70)X10°/m1 左右,充分混勻。再取 5-10u1 懸浮液于清潔載玻片上,將推玻片保持與載玻片 30 度角,置于精液正前方,稍往后移與精液液滴接觸,即可見(jiàn)精液液滴沿推片下緣散開(kāi),再勻速沿載玻片平面平穩(wěn)向前滑動(dòng),使此滴精液在載玻片上充分展開(kāi)。然后在 10X40 倍光徑下掃視載玻片,以確保精液涂片均勻: 10X40 倍鏡下每視野至少有 40 個(gè)精子,并且沒(méi)有精子成團(tuán)或重疊。

操作步驟

1、精液懸液涂片制備完成后,水平放置,空氣中自然干燥

2、 95%乙醇固定 2~3 分鐘,空氣中自然晾干。 干透后水合 1~2 分鐘

3、試劑一核染液染色 30 ~2 分鐘,流水洗凈

4、試劑二漿染液染色 20 ~2 分鐘,不要倒丟,立即滴加增色液混合作用 5 秒左右,再用試劑三增色液沖洗一遍,濾紙吸干。

5、顯微鏡油鏡下鏡檢觀察。

鏡檢結(jié)果

1、精子頂體區(qū)染成淡紫色,頂體后區(qū)染成深紫色,精子體部及尾區(qū)染成淡紅色。

2、世界衛(wèi)生組織(WHO) 精子缺陷型分類(lèi)如下:

1.png

 

3、多重精子缺陷指數(shù)的計(jì)算

WHO 推薦以下列參數(shù)評(píng)價(jià)精子形態(tài)異常: 畸形精子指數(shù)(teratozoospermia index,TZI)或多種異常指數(shù)(multiple anomalies index,MAI),即用缺陷總數(shù)除以畸形精子數(shù)目,以及用精子畸形指數(shù)(sperm deformity index,SDI),即缺陷總數(shù)除以精子總數(shù)。這些參數(shù)預(yù)示精子在體內(nèi)和體外的功能情況。

計(jì)數(shù)方法:染色標(biāo)本結(jié)果觀察時(shí),分別記錄“正常"、“頭部缺陷"、“中段缺陷"和“尾部缺陷"精子數(shù)。如果一個(gè)精子同時(shí)有頭、中段、及尾部缺陷,應(yīng)同時(shí)記錄這三種缺陷,這三種缺陷分別記錄在相應(yīng)的分類(lèi)中,而這個(gè)精子只作為一個(gè)細(xì)胞數(shù)被計(jì)數(shù)。至少計(jì)數(shù) 200 個(gè)精子。

計(jì)算方法示例:

計(jì)數(shù)和精子數(shù):200

 

正常精子數(shù):78

 

正常精子百分比: (78/200X )39%

 

缺陷精子數(shù): (200-78)122 (61%)

 

頭部缺陷精子數(shù):110 (55%)

 

中段缺陷精子數(shù):18 (9%)

 

尾部缺陷精子數(shù):16 (8%)

 

缺陷總數(shù): (110+18+16)144

 

畸形精子指數(shù)(TZI) =(缺陷總數(shù)/缺陷精子數(shù)) =144/122=1.18

精子畸形指數(shù) (SDI) =(缺陷總數(shù)/所數(shù)精子總數(shù))=144/200=0.72

畸形精子指數(shù)(TZI) 的數(shù)值介于 1.00 (每異常精子只有一種缺陷) 3.00 (每個(gè)異常精子都有頭、中段和尾部缺陷) 之間。

有研究表明,TZ>1.6 與未經(jīng)治療不育夫婦的低生育率有關(guān),而且 SDI1.6 是體外受精失敗的閱值。

精子快速染色液

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