蘋果酸脫氫酶(MDH)-測定試劑盒 生化試劑
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- 參考價:0~0
蘋果酸脫氫酶(MDH)-測定試劑盒,催化的氧化還原反應(yīng)伴隨著 340nm 處吸光度的降低,通過測定每分鐘吸光度的變化來計算蘋果酸脫氫酶的活力。
蘋果酸脫氫酶(MDH)-測定試劑盒
(測組織 紫外法)
二、測定原理:
蘋果酸脫氫酶(Malate Dehydrogenase, MDH)催化的氧化還原反應(yīng)伴隨著 340nm 處吸光度的降低,通過測定每分鐘吸光度的變化來計算蘋果酸脫氫酶的活力。
三、測定意義:
MDH 與植物代謝的多條重要途徑有密切關(guān)系,它在運轉(zhuǎn)物質(zhì)和能量的 Mal/OAA(蘋果酸/ 草酰乙酸)和 Mal/Asp(蘋果酸/天冬氨酸)穿梭中起重要作用;在光呼吸中,MDH 為 Gly 氧化提供 NAD+;在線粒體中,MDH 還是決定 TCA 運轉(zhuǎn)速度的調(diào)節(jié)酶之一;在細(xì)胞溶質(zhì)中,MDH 與丙酮酸支路相聯(lián)系。所以 MDH系統(tǒng)不僅是研究酶區(qū)域化和酶調(diào)節(jié)的好系統(tǒng),也為研究各細(xì)胞器之間的聯(lián)系和許多發(fā)育問題提供了方便。根據(jù)近幾年文獻(xiàn)報道,該酶不僅與植物病理有關(guān),還與抗凍,抗鹽有關(guān)。MDH 與抗熱的關(guān)系僅見于對嗜熱菌的報道。
四、操作步驟:
1、10%勻漿液的制備:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1:9 的比例加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機(jī)械勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清液進(jìn)行測定(具體參照實驗方法學(xué))根據(jù)各種組織中 MDH 活力的不同再用生理鹽水按不同的比例將 10%的勻漿上清液稀釋成0.2%,0.1%等不同的濃度待測
2、參考取樣濃度:肝臟勻漿一般為 0.2%;肌肉勻漿一般為 0.5%
3、操作過程:
a、將紫外分光光度計于 340nm 處,0.5cm 光徑石英比色皿,以雙蒸水調(diào)零 (石英比色皿準(zhǔn)備兩只,一只用于調(diào)零,一只用于測定)。
b、將工作液,37℃預(yù)溫 3 分鐘以上。
c、往相應(yīng)編號的試管中加入 50μL 待測樣本,取 1mL 工作液迅速沖入試管中,立即混勻并計時。(空白管取50μL 雙蒸水,加入 1mL 工作液,其它操作與測定相同)
d、迅速倒入石英比色皿中在紫外分光光度計 340nm 處比色,20 秒時讀取吸光度值(A1 值),在 1 分 20 秒時再次測定吸光度值(A2值);
e、求出 2 次吸光度差值(△A=A1-A2)。
[注]:空白管只須做 1~2 只 (空白 OD 很穩(wěn)定);若△A 測定/分鐘<0.05 則需加大樣本的濃度;否則影響檢測結(jié)果;若△A 測定/分鐘>0.3,則需將樣本的濃度稀釋后再測;否則影響檢測結(jié)果。
請在批量檢測前一定要取正常對照組樣本做此樣本濃度的預(yù)試
附錄Ⅰ:小鼠肝組織勻漿反應(yīng)曲線
1、樣本來源:取小鼠新鮮肝臟,用生理鹽水制成 10%的勻漿液再用生理鹽稀釋成 0.2%待測。
2、操作過程:
a、將紫外分光光度計于 340nm 處,0.5cm 光徑石英比色皿,以雙蒸水調(diào)零 (石英比色皿準(zhǔn)備兩只,一只用于調(diào)零,一只用于測定)。
b、將工作液,37℃預(yù)溫 3 分鐘以上。
c、往相應(yīng)編號的試管中加入 50μL 待測樣本,取 1mL 工作液迅速沖入試管中,立即混勻并計時。(空白管取50μL 雙蒸水,加入 1mL 工作液,其它操作與測定相同)
d、迅速倒入石英比色皿中在紫外分光光度計 340nm 處比色,20 秒時讀取吸光度值(A1 值),在 1 分 20 秒時再次測定吸光度值(A2值);
e、求出 2 次吸光度差值(△A=A1-A2)。
蘋果酸脫氫酶(MDH)-測定試劑盒